反刍动物埃立克体微滴数字PCR方法的建立及初步应用

为建立反刍动物埃立克体(E.ruminantium)准确定量的微滴数字PCR方法(ddPCR)，本研究以E.ruminantium p CS20基因为靶基因，选取保守区域设计引物和探针，建立了E.ruminantium dd PCR方法。利用本研究建立的dd PCR方法检测E.ruminantium、牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、无形体、犬埃立克体、牛埃立克体、马埃立克体和立氏埃立克体等，结果显示仅E.ruminantium出现特异性扩增，而与其他寄生虫均无交叉反应，特异性强；将p UC57-p CS20重组质粒标准品10倍倍比稀释(1×10-1拷贝/μL～1×105拷贝/μL)后，利用该dd PCR方法检测，结果显示，该方法对重组质粒标准品的检测限为1.8拷贝/μL，比相应荧光定量PCR方法的敏感性高10倍，本实验建立的dd PCR方法敏感性高；批内和批间重复性试验结果变异系数(CV)均小于2%，重复性好。利用建立的dd PCR方法对50只钝眼蜱样品检测，结果显示，阳性样品反刍动物埃立克体核酸的最低拷贝数为26拷贝/μL,dd PCR和荧光定量PCR检测试剂盒的检出率均为1...