| 4种牛分枝杆菌特异性基因PCR检测方法的比较与评价 |
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| 引用本文： | 辛凌翔,王豪杰,刘燕,姚文生,胡云皓,张一帜,赵浩然,鑫婷,朱良全.4种牛分枝杆菌特异性基因PCR检测方法的比较与评价[J].畜牧与兽医,2023(12):55-61. |
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| 作者姓名： | 辛凌翔 王豪杰 刘燕 姚文生 胡云皓 张一帜 赵浩然 鑫婷 朱良全 |
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| 作者单位： | 1. 中国兽医药品监察所;2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目(2022YFD1800703)； |
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| 摘 要： | 牛分枝杆菌是严重危害养牛业的重要人兽共患病原微生物，PCR是检测该病原的有效手段之一。本研究通过筛选最佳的PCR检测方法，以期为临床监测牛分枝杆菌感染提供技术参考。针对牛分枝杆菌4种常见的特异性基因(16S rRNA、IS6110、IS1081和Mpb64)分别设计引物，通过温度梯度PCR法确定最适退火温度；采用牛分枝杆菌参考株核酸确定PCR最小检测限，同时运用牛分枝杆菌国内参考株、牛分枝杆菌国际参考株、禽分枝杆菌、胞内分枝杆菌、副结核分枝杆菌、羊种布鲁菌以及牛种布鲁菌进行特异性比较试验；最后运用人工模拟牛分枝杆菌感染组织样本(肺脏、淋巴结、奶样)比较不同PCR方法检测效果。4对引物以60℃为退火温度时均能检测分枝杆菌，其中IS6110、IS1081和Mpb64基因引物可以特异性检测牛分枝杆菌。IS6110和IS1081基因引物对牛分枝杆菌基因组的检测灵敏度最高，可达10-10 ng/μL;IS6110基因引物在肺脏和淋巴结中牛分枝杆菌检测灵敏度可达106 CFU/mL以上，而Mpb64基因引物对奶样中牛分枝杆菌的检测灵敏度可达10...
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| 关 键 词： | 牛分枝杆菌 病原 PCR 灵敏度 特异性 |
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