H7N9亚型禽流感病毒HA基因mRNA的构建 |
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作者姓名: | 杨佳欣 刘文宇 李炯颉 陈普成 柳金雄 陈化兰 姜永萍 |
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作者单位: | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室/国家禽流感参考实验室 |
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基金项目: | 国家重点研发计划课题(2022YFD1800603); |
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摘 要: | H7N9亚型禽流感病毒(AIV)持续给家禽及人类健康造成威胁。为构建H7N9亚型AIV (简称H7N9AIV) mRNA疫苗,本研究以AIV分离株A/chicken/Yunnan/SD024/2021 (H7N9)(简称CK/YN/SD024/2021)的HA基因为目的基因、选择来自人β-球蛋白和非洲爪蟾β-球蛋白的不同编码基因序列作为HA基因的非翻译区(UTR),构建了中间转录质粒p GEM-YN和p XT7-YN,以2个质粒为模板通过体外转录制备了mRNA m H7-YN-p GEM和m H7-YN-p XT7;将2种mRNA转染HEK293T细胞,western blot鉴定结果显示2种mRNA转染的细胞均可检测到约为70 ku的HA蛋白条带和50 ku的HA1蛋白条带;通过间接免疫荧光试验(IFA)确定最适转染剂量和HEK293T细胞中HA蛋白的动态表达,结果显示,3μg mRNA转染106个细胞并于转染24 h后荧光信号强度均最强;将2种mRNA转染鸡胚成纤维细胞(CEF),均可通过IFA检测到HA蛋白的表达。以上结果表明,本研究正确构建了2种含H7N9 AIV HA基因的m...
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关 键 词: | H7N9 禽流感病毒 mRNA UTR HA基因 |
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