基于截短绵羊鹦鹉热衣原体r MOMP183-390蛋白的间接ELISA检测方法建立与应用 |
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引用本文: | 曲磊,朱日宁,鞠安琪,魏天,肖丹,王成宇,王思月,张芳毓,王永志.基于截短绵羊鹦鹉热衣原体r MOMP183-390蛋白的间接ELISA检测方法建立与应用[J].中国预防兽医学报,2023(7):710-715. |
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作者姓名: | 曲磊 朱日宁 鞠安琪 魏天 肖丹 王成宇 王思月 张芳毓 王永志 |
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作者单位: | 吉林省农业科学院畜牧兽医研究所 |
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摘 要: | 为建立绵羊鹦鹉热衣原体(Cp)间接ELISA抗体检测方法,本实验将编码Cp主要外膜蛋白MOMP的omp A基因序列按大肠杆菌密码子偏好性优化后,合成质粒p ET-28b (+)-omp A,另外设计特异性引物,分别将omp A截短克隆至p ET-28b(+)载体中构建重组表达质粒p ET-28b(+)-omp A1-182和p ET-28b(+)-omp A183-390,测序鉴定正确后分别转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导并纯化后,经western blot鉴定3个重组蛋白,结果显示,重组MOMP183-390蛋白(r MOMP183-390)表达效果最好。以r MOMP183-390作为包被抗原,采用方阵滴定法优化各反应条件,初步建立了检测Cp抗体的间接ELISA方法。采用建立的该方法检测羊痘病毒、布鲁氏菌、羊口疮病毒、小反刍兽疫病毒、口蹄疫病毒等羊临床常见病的阳性羊血清,结果显示,除Cp外,该方法与其他阳性羊血清均无交叉反应,特异性强;将C...
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关 键 词: | 鹦鹉热衣原体 omp A基因 间接ELISA 待检血清 抗体检测 |
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