中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2 cDNA的克隆及原核表达

 【目的】克隆、分析和原核表达编码中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2的cDNA。【方法】以13个不同日龄中华蜜蜂工蜂触角为材料，通过RT-PCR技术以获得编码中华蜜蜂Apis cerana cerana气味结合蛋白ASP2基因成熟蛋白开放阅读框序列，并在pET-30a（+）/BL21（DE3）系统中进行原核表达。【结果】克隆了命名为Acer-ASP2（GenBank登录号：DQ449667）的中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2基因，该序列全长429 bp，编码142个氨基酸残基，预测分子量和等电点分别为15.7 kD和4.36。预测蛋白具有昆虫气味结合蛋白典型的6个保守的半胱氨酸残基的特征，进一步分析表明Acer-ASP2极有可能属于GOBP家族。构建的原核表达载体pET/Acer-ASP2，在大肠杆菌BL21（DE3）中成功地表达出一个分子量约为21kD的融合蛋白，融合蛋白大部分以包涵体的形式存在于菌体沉淀中（约59.7%），经洗涤和尿素梯度溶解对包涵体进行了纯化，经凝胶光密度扫描分析，约占最终产物的81.2％左右。【结论】克隆、分析和表达了一个新的编码中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2 cDNA序列，为进一步研究其分子结构和功能奠定了基础。

Cloning of cDNA Encoding Odorant Binding Protein ASP2 in Working Bee's Antenna of Apis cerana cerana and Its Prokaryotic Expression