| 鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A原核表达及间接ELISA方法的建立和初步应用 |
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| 引用本文： | 陈汝佳,李婷,余波,张亚楠,蒲龄,欧德渊,徐景峨. 鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A原核表达及间接ELISA方法的建立和初步应用[J]. 中国兽药杂志, 2022, 56(4): 9-16 |
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| 作者姓名： | 陈汝佳 李婷 余波 张亚楠 蒲龄 欧德渊 徐景峨 |
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| 作者单位： | 贵州大学动物科学学院,,,,,,贵州省农业科学院畜牧兽医研究所 |
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| 基金项目： | 贵州省科技计划项目（黔科合支撑[2019]2287号）；贵州省农科院科技创新项目（黔农科院科技创新[2017]03号）；贵州省科技计划项目（黔科合平台人才[2019]5203号）；财政部和农业农村部：国家现代农业产业技术体系； |
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| 摘 要： | 为建立鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法，以RA贵州分离株RAG06基因组为模板扩增并克隆鸭疫里默氏杆菌OmpA基因，构建pET32a-OmpA重组原核表达质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，重组菌经诱导、超声、纯化后，通过SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定获得OmpA重组蛋白大小约57 KD;以OmpA重组蛋白为包被抗原初步建立ELISA方法并优化，经多次方阵检测结果显示，OmpA蛋白以2.243 mg/mL的浓度进行包被，血清以1∶100稀释，抗原包被条件为4℃过夜、封闭条件为37℃120 min、血清反应时间为37℃60 min、酶标抗体工作浓度为1∶1000、酶标抗体反应时间为37℃60 min、显色时间为15 min为最佳条件。确定临界值为0.389。特异性试验表明RA阳性血清有较好反应外，其他血清均无明显反应。批内变异系数2.77%～8.00%,批间变异系数为1.10%～7.80%。当阳性血清稀释比例为1∶1600时，仍可判断为阳性，敏感性较高。应用该方法检测贵州...
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| 关 键 词： | 鸭疫里默氏杆菌 外膜蛋白A 原核表达 ELISA |
| 收稿时间： | 2021-12-03 |
| 修稿时间： | 2022-03-03 |
Prokaryotic expression of outer membrane protein A of Riemerella anatipestis and establishment and preliminary application of indirect ELISA method |
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| Affiliation: | Colllege of Animal Scince,Guizhou University,,,,,, |
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| Keywords: | Riemerella anatipestifer Outer membrane protein A Prokaryotic expression ELISA. |
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