辣椒疫霉菌SSR-PCR反应体系的建立及优化

为快速有效地确定辣椒疫霉菌SSR-PCR反应体系,采用正交优化设计方法,对影响辣椒疫霉菌SSR-PCR反应体系的4个主要因素(模板DNA、引物、d NTPs、Taq酶)在4个水平上进行优化。结果表明,不同因素下各水平浓度对SSR-PCR的反应结果均有显著性影响,最佳反应体系(20μL)为:1.0 ng模板DNA,0.8μmol/L引物,0.5μmol/L d NTPs,1.0 U Taq酶。PCR扩增程序为:94℃预变性2 min;94℃变性15 s,58.4℃退火30 s,36个循环,72℃延伸2 min,最佳循环数为36。利用该体系对12份辣椒疫霉菌进行验证,证明该体系稳定可靠,本试验为辣椒疫霉菌遗传多样性分析研究及分子育种奠定了理论基础。