| 抗杀香鱼假单胞菌溶血素共调节蛋白单链抗体的制备及特性分析 |
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| 引用本文： | 陈韵,施慧,许文军,汪玮,谢建军.抗杀香鱼假单胞菌溶血素共调节蛋白单链抗体的制备及特性分析[J].海洋渔业,2022,44(6):769-779. |
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| 作者姓名： | 陈韵 施慧 许文军 汪玮 谢建军 |
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| 作者单位： | 1. 浙江海洋大学水产学院;2. 浙江省海洋水产研究所浙江省海水增养殖重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2020YFD0900803)； |
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| 摘 要： | 杀香鱼假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是大黄鱼(Larimichthys crocea)内脏白点病的主要致病菌，为制备能识别杀香鱼假单胞菌的特异性抗体，采用固相化抗原筛选方法，以杀香鱼假单胞菌重组溶血素共调节蛋白为抗原，从兔天然噬菌体scFv文库中筛选出特异性的单链抗体(scFv);通过构建含有针对杀香鱼假单胞菌单链抗体(scFv)的重组质粒，对筛选出的scFv进行原核诱导表达。通过4轮淘选，共获得16株针对杀香鱼假单胞菌溶血素共调节蛋白的单链抗体(scFv),通过亲和力分析，最终筛选出7株特异性较高的单链抗体(scFv)进行原核表达；成功构建了含有抗杀香鱼假单胞菌溶血素共调节单链抗体(scFv)的重组质粒pET-30a-Hcp-scFv,转化到大肠杆菌表达菌株中，其中6个重组质粒可稳定表达，经过蛋白质可溶性分析和Western Blot鉴定，目的蛋白主要以包涵体的形式存在。研究结果为快速制备大量抗杀香鱼假单胞菌抗体提供了一种简便的方法，为今后大黄鱼内脏白点病的临床快速诊断奠定了基础。
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| 关 键 词： | 大黄鱼 内脏白点病 杀香鱼假单胞菌 单链抗体 |
Preparation and characterization of single-chain antibodies againstPseudomonas plecoglossicida haemolysinco-regulatory protein |
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