| 委内瑞拉马脑炎病毒E2蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备 |
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| 作者单位： | ;1.解放军军事医学科学院军事兽医研究所/吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室;2.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;3.吉林大学动物医学学院;4.东北农业大学动物医学学院 |
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| 摘 要： | 原核表达并纯化委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV)E2蛋白胞外区,并以此为抗原免疫动物制备多克隆抗体。利用PCR扩增VEEV E2蛋白胞外区基因并将其插入到原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-VEEV-E2,转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达。优化诱导条件并对目的蛋白进行亲和纯化,用纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接免疫荧光方法检测抗体的结合能力。通过PCR扩增出约为1 023bp的VEEV E2基因胞外区,成功构建重组表达质粒pET-30a(+)-VEEV-E2,在37℃,0.6mmol/L IPTG诱导3h条件下目的蛋白表达量最高且主要以包涵体形式存在;将纯化的目的蛋白免疫BALB/C小鼠成功制备了抗VEEV E2蛋白胞外区鼠源多克隆抗体,经间接免疫荧光鉴定制备的抗体能够特异性识别真核表达的VEEV E2蛋白。VEEV E2基因胞外区在大肠杆菌中获得稳定表达,且表达的目的蛋白具有良好的免疫原性,为VEEV快速诊断方法及新型疫苗的研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 委内瑞拉马脑炎病毒 原核表达 纯化 多克隆抗体 |
Prokaryotic expression,purification and identification of the E2 gene from Venezuelan equine encephalitis virus |
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