强、弱毒力新城疫病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立

通过比对新城疫病毒强、弱毒株F基因序列,根据其在F0裂解位点的差异以及F基因保守序列设计合成NDV-V-probe和NDV-L-probe探针组和NDV-F、NDV-R引物组,以基因Ⅶ型NA-1株和基因Ⅱ型LaSota疫苗株病毒RNA作为定量检测的标准品,建立检测方法。对所建立的标准曲线进行分析,相关系数R2均为0.997,线性关系良好。通过计算变异系数CV/%分别为0.034%和0.027%,均小于1%,说明稳定性良好。对禽类常见病毒IBV、H9亚型AIV检测未发现有交叉反应,特异性好、重复性佳。结果表明:成功建立了新城疫病毒强、弱毒双重荧光定量RT-PCR的检测方法,实现了从分子水平上快速鉴别强、弱毒力的新城疫病毒,也可快速区分野毒感染动物和疫苗接种动物,减少不必要的经济损失。

Establishment of a duplex fluorescence quantitative RT-PCR detection system to distinguish NDV velogenic from lentogenic strains