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牛冠状病毒NS 32蛋白的原核表达及免疫原性分析
作者姓名:王苗  杜万年  田占云  于秀剑  刘勃兴  吴同垒  史秋梅  张志强
作者单位:河北科技师范学院,河北 秦皇岛 066004
基金项目:石家庄市藁城区科技局项目;河北省现代农业产业技术体系创新团队肉牛疫病防控岗位项目;秦皇岛市重点研发计划科技支撑项目;河北省重点研发计划项目
摘    要:试验为了研究牛冠状病毒NS32蛋白的免疫原性,以NS32作为研究对象,通过原核表达分析其抗原性。首先,从牛冠状病毒基因组中克隆出NS32编码基因,进一步将其克隆到原核表达载体上;其次,通过纯化重组的His-NS32蛋白进一步免疫小鼠,测定其特异性抗体水平评估NS32蛋白免疫原性。本试验成功地利用反转录PCR克隆出NS32基因,其片段大小为837 bp,序列同源性分析结果显示,该基因在不同牛冠状病毒分离株间高度保守。通过原核表达系统纯化蛋白并成功获得目的蛋白HiS-NS32,SDS-PAGE显示其大小约为32 ku。将纯化的蛋白免疫小鼠,免疫小鼠能够产生针对NS32蛋白的高水平特异性抗体,证明牛冠状病毒非结构蛋白NS32同样具有较高的免疫原性。本试验通过表达NS32蛋白证实了其免疫原性,为后期的NS32蛋白研究奠定了基础。

关 键 词:牛冠状病毒  NS32基因  原核表达  免疫保护力
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