| 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株感染性分子克隆的建立及拯救病毒的鉴定 |
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| 引用本文： | 张善瑞,周艳君,朱建平,童武,姜一峰,童光志. 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株感染性分子克隆的建立及拯救病毒的鉴定[J]. 中国预防兽医学报, 2011, 33(7). DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.2011.07.01 |
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| 作者姓名： | 张善瑞 周艳君 朱建平 童武 姜一峰 童光志 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院 上海兽医研究所/猪传染病研究室,上海,200241 |
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| 基金项目： | NSFC-广联合基金项目，上海市科技人才计划项目，国际合作项目，国家生猪现代产业技术体系建设项目，中央科研院所公益性基础科研业务费项目 |
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| 摘 要： | 为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆,本实验根据PRRSV HuN4株基因组序列设计并合成PRRSV特异性引物,应用RT-PCR技术分6段扩增了PRRSV HuN4株全基因组cDNA.将扩增的各个cDNA部分重叠片段分别克隆于pBlueScript Ⅱ SK(+)载体中构建了感染性重组质粒pHuN4.并在病毒cDNA 5′末端引入sp6启动子序列便于后期的体外转录获得病毒的转录本,在3'末段Poly (A)尾引入Not Ⅰ酶切位点用于线性化pHuN4;此外,将HuN4基因组第14680位的A沉默突变为G产生一个Mlu Ⅰ酶切位点作为鉴定拯救病毒的分子标记.pHuN4通过酶切线性化后经体外转录及转染BHK细胞,并在Marc-145细胞中救获病毒.结果显示:救获的病毒能够在Marc145细胞引起明显的细胞病变;间接免疫荧光检测以及分子标记验证结果表明病毒拯救成功,而且拯救的病毒与亲本强毒生长曲线没有显著差异.利用拯救的第5代克隆病毒株对本动物进行致病性试验,结果显示实验猪在感染后第3d开始出现体温升高、厌食、消瘦等临床表现,发病率达100％,在感染后20 d内陆续死亡,表明拯救的病毒保持了与亲本病毒株相一致的致病特征,以上研究证实我们成功的构建并获得PRRSV强毒HuN4株感染性克隆,为从基因水平上研究PRRSV的致病机制提供了技术平台.
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 HuN4株 感染性分子克隆 |
Generation of a infectious cDNA clone of highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus HuN4 |
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| ZHANG Shan-rui,ZHOU Yan-jun,ZHU Jian-ping,TONG Wu,JIANG Yi-feng,TONG Guang-zhi. Generation of a infectious cDNA clone of highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus HuN4[J]. Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine, 2011, 33(7). DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.2011.07.01 |
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| Authors: | ZHANG Shan-rui ZHOU Yan-jun ZHU Jian-ping TONG Wu JIANG Yi-feng TONG Guang-zhi |
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| Affiliation: | ZHANG Shan-rui,ZHOU Yan-jun,ZHU Jian-ping,TONG Wu,JIANG Yi-feng,TONG Guang-zhi (Division of Swine Infectious Diseases,Shanghai Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Shanghai 200241,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcine reproductive and respiratory syndrome virus HuN4 strain infectious cDNA clone |
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