| 萝卜DDRT-PCR技术体系的优化 |
| |
| 引用本文： | 贾 晋,张鲁刚.萝卜DDRT-PCR技术体系的优化[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2008,36(4):128-134. |
| |
| 作者姓名： | 贾 晋 张鲁刚 |
| |
| 作者单位： | 西北农林科技大学,园艺学院陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西,杨凌,712100 |
| |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)
,
陕西省科技厅陕西省13115工程项目 |
| |
| 摘 要： | 【目的】探索快速高效的RNA提取方法,建立高效率的mRNA差异显示体系。【方法】以萝卜幼嫩薹叶及花蕾为材料,比较了酸性酚-异硫氰酸胍-氯仿提取法(异硫氰酸胍法)与BIOZOL试剂法提取RNA的效果,并对DDRT-PCR体系中Taq酶、Mg2+、dNTPs、引物及cDNA用量进行了优化。【结果】BIOZOL试剂提取的RNA量大质好,经纯化后,其OD260/OD280值为1.8~2.1,表明杂质少,质量浓度大于1μg/μL,符合mRNA差异显示的要求;确定的最佳DDRT-PCR反应体系(20μL)为:10×Buffer 2.5 mmol/L,Mg2+2.8 mmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,Taq酶1.5 U,锚定引物2.5μmol/L,随机引物1.25μmol/L,cDNA用量0.5μL。mRNA差异显示结果表明,高分辨率的片断为100~1 000 bp。经验证,该体系也适用于大白菜和油菜mRNA差异显示研究。【结论】通过两种RNA提取方法比较和DDRT-PCR体系优化,获得了萝卜最佳RNA提取方法及mRNA差异显示反应体系。
|
| 关 键 词： | 萝卜 RNA提取 DDRT-PCR 体系优化 |
| 文章编号： | 1671-9387(2008)04-0128-07 |
| 收稿时间： | 2007/10/18 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2007年10月18 |
mRNA differential display technique in radish(Raphanus sativus) |
| |
| JIA Jin,ZHANG Lu-gang.mRNA differential display technique in radish(Raphanus sativus)[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2008,36(4):128-134. |
| |
| Authors: | JIA Jin ZHANG Lu-gang |
| |
| Institution: | (College of Horticulture,Northwest A & F University,Key Laboratory of Agriculture Molecular Biology,Yangling,Shaanxi 712100,China) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《西北农林科技大学学报(社会科学版)》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《西北农林科技大学学报(社会科学版)》下载免费的PDF全文 |
|
