转基因抗草甘膦棉花R1-3株系的分子特征鉴定 |
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引用本文: | 马燕斌,李换丽,文晋,周仙婷,秦欣,王霞,王新胜,李燕娥.转基因抗草甘膦棉花R1-3株系的分子特征鉴定[J].中国农业科学,2023(17):3277-3284. |
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作者姓名: | 马燕斌 李换丽 文晋 周仙婷 秦欣 王霞 王新胜 李燕娥 |
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作者单位: | 1. 山西农业大学棉花研究所;2. 山西农业大学农学院;3. 运城学院生命科学系 |
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基金项目: | 山西省应用基础研究面上项目(202103021224145); |
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摘 要: | 【目的】通过转化抗草甘膦除草剂基因G10aroA获得抗草甘膦除草剂的棉花转基因株系,对其进行分子特征鉴定分析,为今后棉花育种利用该株系提供必要的分子依据。【方法】利用农杆菌介导法,在草甘膦筛选条件下,通过组织培养获得棉花再生株系,利用Western blot对转基因棉花株系不同组织的外源蛋白表达进行检测;通过Southern blot确定株系中外源G10aroA整合位点的拷贝数;利用TAIL-PCR扩增外源基因整合位点侧翼序列,并通过NCBI BLAST工具比较分析其定位的染色体位置。【结果】通过草甘膦筛选,利用组织培养获得R1-3棉花再生株系;Western blot结果表明,外源基因在叶、苞叶、花、茎中均可正常表达,其蛋白大小约为46 kDa,与预期目标条带一致;基因组DNA酶切后杂交结果显示,R1-3株系外源序列的整合位点为单拷贝插入,其中,KpnⅠ酶切的杂交条带位于约6 557 bp处,Eco RⅠ酶切的2条杂交带位于略大于4 316 bp处;侧翼序列比对结果显示,外源序列融合到陆地棉A或D基因组的第11号染色体上,且在交换插入的过程中,左右边界的融合位点分别位于该染色体47 ...
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关 键 词: | 陆地棉 抗草甘膦棉花 拷贝数 融合位点 分子特征 |
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