猪SsMT-1A和SsMT-2A的原核表达及金属结合特性研究 |
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作者姓名: | 杨惠珍 杨欢 吴子璇 范阔海 尹伟 孙盼盼 钟佳 孙娜 李宏全 |
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作者单位: | 1. 中兽医药现代化山西省重点实验室/山西农业大学动物医学学院;2. 中兽医药现代化山西省重点实验室/山西农业大学动物实验中心 |
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基金项目: | 山西省高等学校科技创新项目(2021L144);;山西农业大学科技创新基金博士科研启动项目(2020BQ66); |
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摘 要: | 【目的】通过对猪(Sus Scrofa)金属硫蛋白1A(metallothionein-1A of S. Scrofa, SsMT-1A)和2A(Metallothionein-2A of S. Scrofa, SsMT-2A)的生物信息学分析、原核表达和纯化,研究它们与Zn(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)的结合特性。为饲料中添加Zn和Cu在促进猪生产性能的作用机制研究提供理论基础。【方法】首先,从NCBI中获得SsMT-1A和SsMT-2A的基因序列,利用ClustalX2和ExPASy分析两者的蛋白序列和结构差异,利用MEGA-X构建两者与其他物种MT蛋白分子的进化树。其次,构建pET-28a-SUMO-SsMT-1A/SsMT-2A原核表达载体,转化BL21(DE3)plysS,用IPTG诱导表达。利用Ni-NTA柱亲和层析和葡聚糖凝胶层析纯化重组蛋白。最后,利用大肠杆菌金属耐受性实验、圆二色光谱(circular dichroism, CD)、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser analytic ionization time of flight m...
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关 键 词: | 猪 金属硫蛋白-1A 金属硫蛋白-2A 生物信息学分析 原核表达 金属结合特性 |
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