| 小反刍兽疫病毒P蛋白的表达、纯化及抗体的制备及初步应用 |
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| 引用本文： | 翟军军,窦永喜,张海瑞,毛立,蒙学莲,王秋霞,骆学农,才学鹏.小反刍兽疫病毒P蛋白的表达、纯化及抗体的制备及初步应用[J].畜牧兽医学报,2010,41(8). |
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| 作者姓名： | 翟军军 窦永喜 张海瑞 毛立 蒙学莲 王秋霞 骆学农 才学鹏 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,兰州,730046 |
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| 基金项目： | 农业公益性行业科研专项，现代农业产业技术体系建设专项 |
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| 摘 要： | 本文旨在对小反刍兽疫病毒P蛋白进行原核表达,并利用表达的蛋白制备抗血清,然后用于间接免疫荧光检测。将构建好的pET-30a(+)-P重组表达质粒转化大肠杆菌构建P蛋白的原核表达体系。重组菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳检测融合蛋白得到了表达。通过对表达条件的优化,确定了P蛋白在28℃、IPTG诱导浓度为0.2 mmol.μL-1的条件下诱导6 h,可溶性P蛋白表达量最高。利用镍柱亲和层析法纯化可溶性的P蛋白,然后以纯化的蛋白为抗原免疫小鼠,制备了多克隆抗体,其滴度最高可达1∶25 600,而且特异性好,表明获得了P蛋白的多克隆抗体。同时利用所制备的抗体对pcDNA3.1/P真核表达进行了间接免疫荧光检测。P蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达,并制备了特异性好、滴度高的抗血清,为研究P蛋白功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | P蛋白 表达 纯化 抗体制备 应用 |
Expression,Purification and Polyclonal Antibody Preparation and Preliminary Application of Phosphoprotein of Peste des Petits Ruminants Virus |
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| ZHAI Jun-jun,DOU Yong-xi,ZHANG Hai-rui,MAO Li,MENG Xue-lian,WANG Qiu-xia,LUO Xue-nong,CAI Xue-peng.Expression,Purification and Polyclonal Antibody Preparation and Preliminary Application of Phosphoprotein of Peste des Petits Ruminants Virus[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2010,41(8). |
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| Authors: | ZHAI Jun-jun DOU Yong-xi ZHANG Hai-rui MAO Li MENG Xue-lian WANG Qiu-xia LUO Xue-nong CAI Xue-peng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PPRV |
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