| 鳗鲡疱疹病毒ORF8基因的克隆表达及转录时相分析 |
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| 引用本文： | 陈曦,李英英,陈强,宋铁英,葛均青.鳗鲡疱疹病毒ORF8基因的克隆表达及转录时相分析[J].大连海洋大学学报,2021,36(1):10-15. |
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| 作者姓名： | 陈曦 李英英 陈强 宋铁英 葛均青 |
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| 作者单位： | 福建省农业科学院生物技术研究所,福建福州350003 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;福建省农业科学院项目;福建省公益类科研院所基本科研专项 |
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| 摘 要： | 为研究鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus,AngHV)ORF8基因的特性,根据GenBank中AngHV参考株(NC_013668)的ORF8序列设计引物,采取PCR方法从分离的AngHV福建病毒株(AngHV-FJ)基因组中扩增出特异性片段,克隆至pMD19-T载体,经酶切和测序验证,获得了ORF8的基因序列.结果表明:经生物信息学分析,ORF8编码的蛋白稳定性较好,存在跨膜结构且抗原表位多,符合病毒囊膜蛋白的特征;经转录时相分析,ORF8是病毒的早期基因(early gene,E),可能在病毒感染的早期阶段就发挥作用;将ORF8克隆至表达载体pET-32a,转化人大肠杆菌E.coli BL21中,以IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE及Western blot检验,实现了ORF8在大肠杆菌中的高效表达,进一步通过割胶的方法获得了相对分子质量约为44 000的高纯度融合表达蛋白.本研究为下一步评价该表达蛋白的免疫效果和制备抗体,以及开发免疫诊断试剂和疫苗提供了研究基础.
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| 关 键 词： | 鳗鲡疱疹病毒 ORF8基因 转录时相 克隆 原核表达 |
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