| 传染性胰脏坏死病毒VP3抗血清的制备及应用 |
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| 引用本文： | 陈桂花,贺文斌,徐黎明,赵景壮,任广明,邵轶智,段凯越,卢彤岩.传染性胰脏坏死病毒VP3抗血清的制备及应用[J].大连海洋大学学报,2021,36(4):573-579. |
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| 作者姓名： | 陈桂花 贺文斌 徐黎明 赵景壮 任广明 邵轶智 段凯越 卢彤岩 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学 水产科学国家级实验教学示范中心, 上海201306;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所, 黑龙江 哈尔滨150070;上海海洋大学 农业农村部渔业动植物病原库, 上海 201306;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所, 黑龙江 哈尔滨150070;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所, 黑龙江 哈尔滨150070;中国水产科学研究院长江水产研究所, 湖北 武汉430223 |
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| 摘 要： | 为丰富传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreas necrosis virus,IPNV)的检测方法,以GenogroupⅠ型的IPNV ChRtm213分离株基因组RNA为模板,利用一步法RT-PCR扩增获得了编码IPNV VP3基因序列(711 bp),将其克隆至pET-32a原核表达载体,利用大肠杆菌Rosetta进行VP3蛋白表达,以纯化的VP3蛋白为免疫原制备鼠抗血清,利用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对抗血清效价进行测定,并利用间接免疫荧光抗体法(indirect immunofluorescent antibody test,IFAT)和中国不同地区的IPNV分离株,对抗血清识别中国现行IPNV分离株的能力进行免疫学鉴定.结果表明:SDS-PAGE分析显示,表达纯化的VP3蛋白条带单一,相对分子质量约为45000,与理论值相符;抗血清效价分析显示,所制备的鼠抗IPNV VP3血清与IPNV的反应效价为16000,与纯化的IPNV VP3蛋白的反应效价为32000;间接免疫荧光抗体法分析显示,制备的鼠抗血清能够特异性识别中国不同地区的GenogroupⅠ和GenogroupⅤIPNV分离株,且该血清不与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)发生交叉反应,具备较好的特异性.研究表明,本研究中利用原核表达系统表达的IPNV VP3蛋白具有良好的免疫原性,所制备的IPNV VP3抗血清能够特异性识别中国不同地区的IPNV分离株.
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| 关 键 词： | 传染性胰脏坏死病毒 蛋白表达 VP3蛋白 免疫原性 |
Preparation and application of VP3 antiserum of infectious pancreatic necrosis virus |
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| Authors: | CHEN Guihua HE Wenbin XU Liming ZHAO Jingzhuang REN Guangming SHAO Yizhi DUAN Kaiyue LU Tongyan |
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