鲤鱼春季病毒出血症病毒G基因在昆虫细胞中的表达与鉴定 |
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引用本文: | 李月红,付云红,陈奇,王永志,扈荣良.鲤鱼春季病毒出血症病毒G基因在昆虫细胞中的表达与鉴定[J].兽医大学学报,2012(4):505-508. |
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作者姓名: | 李月红 付云红 陈奇 王永志 扈荣良 |
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作者单位: | [1]吉林农业大学动物科技学院,吉林长春130118 [2]解放军军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122 [3]吉林省农业科学院,吉林长春130124 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目(30972191); 吉林省科技发展计划资助项目(20100232) |
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摘 要: | 采用RT-PCR方法扩增鲤鱼春季病毒出血症病毒(SVCV)的糖蛋白(G)基因,将PCR产物插入到杆状病毒转移载体pFastBac 1中,获得重组转移载体pFastBac 1-G,将其转化入含有Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,经3种抗性和蓝白斑筛选,获得含有G基因的重组穿梭质粒rBacmid-G。在脂质体转染试剂的介导下,将rBacmid-G转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。提取重组杆状病毒基因组,用M13引物PCR鉴定。对重组杆状病毒感染的sf9细胞,通过电镜观察、SDS-PAGE、Western blotting进行检测,结果表明,重组蛋白在sf9细胞中获得正确表达,相对分子质量约58 000,与鼠抗SVCV阳性血清具有良好的反应原性。本试验为研究鲤鱼春季病毒出血症病毒G蛋白的生物学活性和亚单位疫苗的研制奠定了基础。
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关 键 词: | 鲤鱼春季病毒出血症病毒 G基因 杆状病毒表达 |
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