新疆巴什拜羊ISG15基因的克隆表达及活性检测 |
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引用本文: | 鲁海富,沈文,崔茹鹏,杨文,姜方配,孙延鸣.新疆巴什拜羊ISG15基因的克隆表达及活性检测[J].江苏农业科学,2013(7):26-29. |
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作者姓名: | 鲁海富 沈文 崔茹鹏 杨文 姜方配 孙延鸣 |
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作者单位: | 石河子大学动物科技学院 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(编号:31060351) |
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摘 要: | 克隆表达新疆巴什拜羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测。利用RT-PCR和RACE技术克隆了巴什拜羊ISG15基因的cDNA全长序列,将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni2+螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化,通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性。结果表明:克隆得到的巴什拜羊ISG15基因cDNA全长为646 bp,开放阅读框为474 bp,编码157个氨基酸。经酵母重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达,SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33 ku,表达的蛋白可用Ni2+螯合亲和层析方法纯化,淋巴细胞增殖试验结果显示,表达的ISG15蛋白能够显著地刺激淋巴细胞增殖(P<0.05),表明表达的蛋白具有生物学活性。
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关 键 词: | 巴什拜羊 ISG15 克隆表达 活性检测 |
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