基于酵母同源重组的转录因子活性分析

转录因子的转录激活验证是分析其转录活性的有效手段之一。黄曲霉菌bZIP5基因广泛参与该菌的生长发育，因此拟进行该转录因子的体外活性检测，以pGBKT7为骨架载体，采用酵母同源重组法构建载体，与体外重组酶法进行比较，并考察不同长度同源序列对酵母同源重组法构建载体的影响。结果表明：采用外源重组酶法构建载体pGBKT7-bZIP5，需要经过片段的体外重组连接、转化大肠杆菌，再提取质粒转化酵母AH109进行激活验证；而酵母同源重组法只需将线性化载体和片段一起转化酵母AH109，载体构建与激活验证同步完成，且21 ~ 30 bp不同长度的同源序列对酵母同源重组法构建载体没有影响，目的基因bZIP5均显示有自激活能力，故基于酵母同源重组的载体构建方法可行。该方法无需提供外源重组酶，为基于酵母的载体构建提供了便捷的途径。