| 利用 GST pull-down 联合质谱技术鉴定H7N9 禽流感病毒 PA-X 的互作蛋白 |
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| 引用本文： | 徐国双,姜童潇,郭艺迪,段铭,张茂林,关振宏. 利用 GST pull-down 联合质谱技术鉴定H7N9 禽流感病毒 PA-X 的互作蛋白[J]. 广东农业科学, 2022, 49(1): 121-127. DOI: 10.16768/j.issn.1004-874X.2022.01.014 |
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| 作者姓名： | 徐国双 姜童潇 郭艺迪 段铭 张茂林 关振宏 |
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| 作者单位： | 吉林大学人兽共患病研究所/人兽共患病教育部重点实验室,吉林 长春 130062 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（32072902） |
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| 摘 要： | [目的]为探究H7N9亚型禽流感病毒(AIV)PA-X蛋白的功能,采用GST pull-down联合质谱技术筛选与鉴定与PA-X相互作用的宿主蛋白.[方法]构建PA-X的重组表达载体pGEX-4T-PA-X,转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白,并利用GST亲合树脂进行纯化得到GST-PA-X融合蛋白.利用GST pull-down技术,将GST-PA-X和GST对照蛋白分别与A549细胞裂解液总蛋白进行体外孵育,得到的蛋白复合物经SDS-PAGE分离后进行质谱检测分析.[结果]经GST pull-down筛选与质谱分析鉴定后得到39个高可信度的可能与PA-X互作的候选蛋白质.通过GO注释和KEGG等通路富集分析发现,这些蛋白主要参与RNA的代谢及加工、mRNA翻译及运输、多肽生物合成及基因表达的转录后调节等生物学过程.对其中评分最高的蛋白Hsp70-2与PA-X的相互作用作进一步验证,免疫荧光试验结果表明Hsp70-2与PA-X可以在细胞浆中共定位.[结论]利用GST pull-down联合质谱技术筛选到39种与PA-X互作的候选蛋白,且经免疫荧光试验证明候选蛋白Hsp70-2与PA-X存在共定位,为深入探讨PA-X在AIV生命周期中的作用机制奠定基础.
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| 关 键 词： | 禽流感病毒H7N9 PA-X GST pull-down 质谱 Hsp70-2 蛋白互作 |
Identification of Proteins Interacting with PA-X from H7N9 Avian Influenza Virus by GST pull-down Combined with Mass Spectrometry |
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| XU Guoshuang,JIANG Tongxiao,GUO Yidi,DUAN Ming,ZHANG Maolin,GUAN Zhenhong. Identification of Proteins Interacting with PA-X from H7N9 Avian Influenza Virus by GST pull-down Combined with Mass Spectrometry[J]. Guangdong Agricultural Sciences, 2022, 49(1): 121-127. DOI: 10.16768/j.issn.1004-874X.2022.01.014 |
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| Authors: | XU Guoshuang JIANG Tongxiao GUO Yidi DUAN Ming ZHANG Maolin GUAN Zhenhong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | H7N9 AIV PA-X GST pull-down mass spectrometry Hsp70-2 protein interaction |
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