小鼠胚胎成纤维细胞饲养层制备条件的研究

为了建立活力稳定的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层，本实验以13．5～14．5d的ICR小鼠胚胎为实验材料，以MTT法测定细胞活力，探讨了不同浓度的丝裂霉素C、丝裂霉素C不同处理时间及不同的成纤维细胞接种密度对MEF活力的影响。结果表明：10μg／ml的丝裂霉素C处理后的MEF活力比其他浓度（1μg／ml、5μg／ml、20μg／ml、30μg／ml）丝裂霉素C处理后的MEF活力稳定；用10μg／ml的丝裂霉素C处理2．5h，MEF活力比处理1．5h、3．5h、4．5h稳定；以2．5～35×10^5／ml密度接种于96孔板上，每孔200μl，MEF活力较接种密度为1．5×10^5／ml、4．5×10^5／ml、7．5×10^5／ml稳定。结论：用10μg／ml丝裂霉素C处理MEF 2．5h，2．5～3．5×10^5／m;密度接种于96孔板上，每孔200μl，以10％的胎牛血清培养液培养能得到活力稳定高效的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层。