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| 梅花鹿Col X基因的RNAi重组慢病毒载体的构建及鉴定 | |
| 引用本文： | 褚文辉,赵海平,杨福合,邢秀梅,刘国庆,李春义.梅花鹿Col X基因的RNAi重组慢病毒载体的构建及鉴定[J].中国农业大学学报,2009,14(4). |
| 作者姓名： | 褚文辉 赵海平 杨福合 邢秀梅 刘国庆 李春义 |
| 作者单位： | 1. 江苏科技大学,生物与环境工程学院,江苏镇江212018;中国农业科学院,特产研究所,吉林吉林132109 2. 中国农业科学院,特产研究所,吉林吉林132109 3. 北京大学医学部,北京,100871 |
| 摘 要： | 研究十型胶原蛋白(Collagen type X,Col X),在软骨内成骨过程中所起的作用.本研究针对梅花鹿ColX基因设计筛选2条高分RNAi靶序列,在T4 DNA连接酶的作用下分别与慢病毒载体质粒plvthm连接,形成重组质粒S2-plvthm/S3-plvthm;PCR筛选阳性克隆并测序鉴定.用Lipofectamine 2000介导S2-plvthm/S3-plvthm,pCMVdr8.91,pMD2G三质粒共转染293T细胞.结果显示:转染24 h后,观察到表达荧光蛋白的293T细胞.收集培养液后进行1 000 g离心5 min,所得上清液含有重组慢病毒的组分.S2-plvthm/S3-plvthm上清液中病毒滴度分别达到9.96×107TU/L和7.18×107TU/L.以此病毒感染梅花鹿角柄骨膜细胞,并进行微粒体培养,72 h后出现肉眼可见的白色微团,该细胞团有荧光表达.本试验成功地构建了针对梅花鹿Col X基因的慢病毒裁体,为了研究Col X蛋白在鹿茸角骨化中的作用奠定了基础. |
| 关 键 词： | 鹿茸 角柄 ColX基因 RNAi 慢病毒载体 微粒体培养 |
Construction and Characterization of lentiviral vector of RNA interference of collagen type X gene of sika deer |
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| CHU Wen-hui,ZHAO Hai-ping,YANG Fu-he,XING Xiu-mei,Liu Guo-qing,LI Chun-yi.Construction and Characterization of lentiviral vector of RNA interference of collagen type X gene of sika deer[J].Journal of China Agricultural University,2009,14(4). | |
| Authors: | CHU Wen-hui ZHAO Hai-ping YANG Fu-he XING Xiu-mei Liu Guo-qing LI Chun-yi |
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