| 不同探针大小、标记物及反应底物对马铃薯类病毒杂交检测的影响 |
| |
| 引用本文： | 吕典秋,刘尚武,邱彩玲,李勇,宿飞飞,王绍鹏,吕文河. 不同探针大小、标记物及反应底物对马铃薯类病毒杂交检测的影响[J]. 植物病理学报, 2011, 41(2): 154-160 |
| |
| 作者姓名： | 吕典秋 刘尚武 邱彩玲 李勇 宿飞飞 王绍鹏 吕文河 |
| |
| 作者单位： | 东北农业大学农学院； 黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所农业部脱毒马铃薯质量监督检验测试中心； |
| |
| 基金项目： | 国家科技部基础研究重大项目，黑龙江省攻关重大项目，农业部马铃薯产业创新体系 |
| |
| 摘 要： | 灵敏可靠地检测马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)对脱毒种薯的生产具有重要意义。本研究探索了影响核酸杂交检测技术的关键因素。通过基因克隆技术构建了插有PSTVd全长单体、双体及片段的载体。分别以地高辛和同位素为标记物,利用PCR和转录标记技术制备cDNA和RNA探针。比较探针大小、标记物、标记方法、反应底物等对检测灵敏度的影响。结果显示,以地高辛为标记物,利用PCR标记制备的PSTVd双体cDNA探针,在以CDP-Star为底物,通过在柯达X-OMAT BT胶片进行化学发光反应来分析结果的检测灵敏度最高,可以检测到0.05 pg总RNA中的PSTVd,是国外报道检测灵敏度的500倍。利用核酸斑点杂交技术检测PSTVd具有灵敏度高,一次可检测样品数量多等特点,对于大规模PSTVd检测更加方便可行。
|
| 关 键 词： | 马铃薯纺锤块茎类病毒 探针 核酸斑点杂交 标记 |
Comparison of different size of probes, labels and detection substrates for diagnosis of Potato spindle tuber viroid by nucleic acid spot hybridization |
| |
| LV Dian-qiu,LIU Shang-wu,QIU Cai-ling,LI Yong,XU Fei-fei,WANG Shao-peng,LV Wen-he. Comparison of different size of probes, labels and detection substrates for diagnosis of Potato spindle tuber viroid by nucleic acid spot hybridization[J]. Acta Phytopathologica Sinica, 2011, 41(2): 154-160 |
| |
| Authors: | LV Dian-qiu LIU Shang-wu QIU Cai-ling LI Yong XU Fei-fei WANG Shao-peng LV Wen-he |
| |
| Affiliation: | LV Dian-qiu1,2,LIU Shang-wu2,QIU Cai-ling2,LI Yong2,XU Fei-fei2,WANG Shao-peng2,LV Wen-he1(1College of Agronomy,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China,2Virus-free Seedling Research Institute of Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences,Supervision and Testing Center for Virus-free Potato Seeds of Ministry of Agriculture,Harbin 150086,China) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Potato spindle tuber viroid(PSTVd) probe nucleic acid spot hybridization(NASH) labeling |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《植物病理学报》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《植物病理学报》下载全文 |
|
