济麦20 α 醇溶蛋白基因的克隆与序列分析

α 醇溶蛋白不仅与小麦面粉的加工品质密切相关，也是诱发乳糜泻（celiac disease，CD）的主要活力蛋白。为了解强筋优质小麦济麦20的α 醇溶蛋白组成及其CD毒性，利用1对α 醇溶蛋白特异引物，采用基因组PCR法，从济麦20中扩增、克隆了27个具有独特编码区的核苷酸序列(命名为：JM20A 1~ JM20A 27，GenBank注册号为：JN831386~JN831392和JX828280~JX828311)。其中，18个核苷酸序列（ JM20A 1~ JM20A 18）具有完整的开放阅读框, 可编码280~313个氨基酸残基组成的α 醇溶蛋白。这18个基因的氨基酸序列除JM20A 1和JM20A 2在特征II区含有1个额外的半胱氨酸外，其他16个均具有α 醇溶蛋白的典型结构特点，含有6个保守的半胱氨酸。对CD免疫肽的分布分析发现，这18个基因的编码蛋白均符合D基因组来源的α 醇溶蛋白的特点，以不同的组合含有2~4种主要的T细胞免疫优势多肽，定位于6D染色体。与来源于栽培一粒小麦（Triticum monococcu）、拟斯脾尔脱山羊草（Aegilops speltoides）和粗山羊草（Aegilops tauschii）的92个α 醇溶蛋白的氨基酸序列的同源性分析表明，这18个基因均与来源于粗山羊的α 醇溶蛋白基因的同源性最高，进一步说明这些基因很可能来源于6D染色体。