| 猪转录因子Nanog高效表达、多克隆抗体制备及其应用 |
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| 引用本文： | 王传振,刘晓鹏,崔怡,王华岩. 猪转录因子Nanog高效表达、多克隆抗体制备及其应用[J]. 农业生物技术学报, 2016, 0(1): 35-43. DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.01.005 |
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| 作者姓名： | 王传振 刘晓鹏 崔怡 王华岩 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学动物医学院,杨凌,712100 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.31371505)和国家重大基础研究发展规划(973)(No.2011CBA01002) |
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| 摘 要： | 多能转录因子Nanog可维持干细胞的自我更新和多向分化潜能.为深入研究猪(Sus scrofa)Nanog在多能性调控网络的作用,本研究制备了鼠抗猪源Nanog多克隆抗体.首先,从猪肾脏中克隆Nanog基因CDS,再将CDS连接到pET32a质粒上,构建重组表达载体pET32a-Nanog.将重组载体转化大肠杆菌(Escherichia coli) Rosetta (DE3),经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,优化最佳诱导时间、温度和IPTG浓度等表达条件,获得分子量为57 kD的Nanog重组蛋白.将纯化的Nanog蛋白,免疫C57BL/6小鼠(Mus musculus),6周后获得阳性抗血清,通过Western blot和免疫荧光检测其抗体效价及其特异性.结果显示,在28℃、8 mmol/L IPTG、诱导2.5 h的条件下,可获得高效Nanog重组表达;制备的鼠抗猪Nanog多克隆抗体能特异性识别猪诱导多能干细胞表达的Nanog蛋白.研究结果为猪多能性干细胞的研究提供了有力工具.
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| 关 键 词： | 猪 Nanog 干细胞 原核表达 多克隆抗体 |
High Level Expression,Preparation and Application of Anti-Nanog Polyclonal Antibody of Porcine (Sus scrofa) Nanog Protein |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pig (Sus scrofa) Nanog Stem cells Prokaryotic expression Polyclonal antibody |
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