| 一株新型大口黑鲈双RNA病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 罗明菊,李宁求,林强,牛银杰,刘礼辉,梁红茹,罗霞,付小哲. 一株新型大口黑鲈双RNA病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 水产学报, 2021, 45(9): 1584-1591 |
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| 作者姓名： | 罗明菊 李宁求 林强 牛银杰 刘礼辉 梁红茹 罗霞 付小哲 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学水产与生命学院,上海 201306;中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业农村部渔用药物创制重点实验室,广东省水产动物免疫技术重点实验室,广东 广州 510380;中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业农村部渔用药物创制重点实验室,广东省水产动物免疫技术重点实验室,广东 广州 510380 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31872589） |
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| 摘 要： | 为有效预防大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus, LBBV),实验针对LBBV保守基因VP1设计特异性引物,构建重组质粒pMD-LBBV-VP1,通过优化PCR反应条件,提高检测方法的灵敏度和特异性,建立了大口黑鲈双RNA病毒的巢式RTPCR检测方法,并采用该方法对实验室2017—2020年收集的304株样本进行检测。结果显示,巢氏引物F1/R1、F2/R2最佳工作浓度均为4×10~(-12) mol,最佳退火温度分别为64.1℃和61.5℃,当巢氏RT-PCR扩增35个循环时,可以检测质粒最低浓度为4.15个/μL拷贝数,最低模拟样品浓度为10~2 PFU/mL,与第1轮PCR相比,灵敏度均提高了10 000倍,同时检测9种不同病毒,仅LBBV出现明亮特异性条带,在304个样品中,第1轮PCR检出阳性样品14株,检出率为4.60%,巢式RT-PCR检出阳性样品28株,检出率为9.21%;本实验建立的巢式RT-PCR检测方法灵敏度高且特异性好,可用于LBBV的早期检测及防控。
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| 关 键 词： | 大口黑鲈 双RNA病毒 巢式RT-PCR 检测方法 |
| 收稿时间： | 2020-11-05 |
| 修稿时间： | 2021-01-05 |
Establishment and application of the nested RT-PCR for the detection of a novel largemouth bass birnavirus (LBBV) |
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| LUO Mingju,LI Ningqiu,LIN Qiang,NIU Yinjie,LIU Lihui,LIANG Hongru,LUO Xi,FU Xiaozhe. Establishment and application of the nested RT-PCR for the detection of a novel largemouth bass birnavirus (LBBV)[J]. Journal of Fisheries of China, 2021, 45(9): 1584-1591 |
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| Authors: | LUO Mingju LI Ningqiu LIN Qiang NIU Yinjie LIU Lihui LIANG Hongru LUO Xi FU Xiaozhe |
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| Affiliation: | College of Fisheries and life science,ShangHai Ocean University,ShangHai,,,,,,,Pearl River Fishery Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Key Laboratory of Fishery Drug Development,Ministry of Agriculture,Key Laboratory of Aquatic Animal Immune Technology,Guangdong Provinces |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Birnavirus Largemouth Bass Nested RT-PCR |
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