| 猪日本脑炎病毒NS3基因实时RT-LAMP快速检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 田纯见,林志雄,罗长保,罗琼,鱼海琼,陈茹,曾碧健. 猪日本脑炎病毒NS3基因实时RT-LAMP快速检测方法的建立[J]. 动物医学进展, 2009, 30(12): 34-39 |
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| 作者姓名： | 田纯见 林志雄 罗长保 罗琼 鱼海琼 陈茹 曾碧健 |
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| 作者单位： | 广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,广东广州,510623;广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,广东广州,510623;广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,广东广州,510623;广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,广东广州,510623;广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,广东广州,510623;广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,广东广州,510623;广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,广东广州,510623 |
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| 摘 要： | 建立日本脑炎病毒一步法实时环介导逆转录等温快速扩增方法.根据日本脑炎病毒序列保守的非结构区基因NS3设计4条特异引物,用于扩增SA14-14-2株、SA103株和GD06株日本脑炎病毒获得成功,在病毒感染的单层细胞和猪体内都可以检出病毒.与常规SYBR GreenI适时荧光RT-PCR方法比较和Ct值分析,用不同稀释度病毒RNA,两者敏感性相似,适时RT-PCR在模板浓度低时结果更稳定.FIP和BIP纯度会影响反应效果,反应时间和模板浓度会影响电泳条带.一般63 ℃~65 ℃ 30 min可出现结果,模板浓度低时要适当延长反应时间.以SYBR GreenI为指示剂,RT-LAMP在63 ℃~65 ℃循环扩增检测日本脑炎病毒,1.5 min/循环,30个循环,Ct值为21.5.提示RT-LAMP方法用于日本脑炎诊断、鉴别,是敏感、可靠、成本低廉的方法,有助于人畜日本脑炎的防控工作.
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| 关 键 词： | 日本脑炎病毒 环介导逆转录等温扩增 快速检测 荧光定量 |
Development of a Rapid Assay for the Diagnosis of Japanes Encephalitis by Reverse Transcription Loop-mediated Isothermal Amplification |
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| TIAN Chun-jian,LIN Zhi-xiong,LUO Chang-bao,LUO Qiong,YU Hai-qiong,CHEN Ru,ZENG Bi-jian. Development of a Rapid Assay for the Diagnosis of Japanes Encephalitis by Reverse Transcription Loop-mediated Isothermal Amplification[J]. Progress In Veterinary Medicine, 2009, 30(12): 34-39 |
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| Authors: | TIAN Chun-jian LIN Zhi-xiong LUO Chang-bao LUO Qiong YU Hai-qiong CHEN Ru ZENG Bi-jian |
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| Affiliation: | TIAN Chun-jian,LIN Zhi-xiong,LUO Chang-bao,LUO Qiong,YU Hai-qiong,CHEN Ru,ZENG Bi-jian (Guangdong Inspection and Quarantine Technology Center,Guangzhou,Guangdong,510623,China) |
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