| 一种基于重组截短Gc_(aa407～614)蛋白的赤羽病病毒抗体间接ELISA方法的建立 |
| |
| 引用本文： | 王建华,赵丹,陈本龙,张俊哲,王玉玲,肖妍. 一种基于重组截短Gc_(aa407～614)蛋白的赤羽病病毒抗体间接ELISA方法的建立[J]. 中国动物检疫, 2019, 36(5): 85-92 |
| |
| 作者姓名： | 王建华 赵丹 陈本龙 张俊哲 王玉玲 肖妍 |
| |
| 基金项目： | 天津市应用基础与前沿技术研究计划项目（15JCYBJC30500）；海关总署科技计划项目（2017IK125） |
| |
| 摘 要： | 为建立一种检测赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)抗体的ELISA方法,对Gc蛋白从407位至614位氨基酸的编码序列,经密码子优化后进行基因合成,然后克隆至重组表达载体PET-32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用1 mmol/L IPTG在37℃进行诱导表达。用Ni~(+2)-NTA树脂亲和层析方法纯化重组蛋白(trGc_(aa407~614)),以Western blotting检测其抗原性;用纯化trGc_(aa407~614)建立间接ELISA方法(trGc_(aa407~614)-ELISA),并评价该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示:重组蛋白trGc_(aa407~614)以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达,经Ni~(+2)-NTA树脂亲和层析纯化后的浓度2.4 mg/mL,纯度为94%,对山羊抗AKAV阳性血清呈现较好的抗原反应性;所建立的trGc_(aa407~614)-ELISA方法的最佳抗原包被浓度为4.0μg/mL,血清稀释度为1:80,血清阴阳性的OD450临界值为0.318;该方法对AKAV阳性血清呈特异性反应,组内试验和组间试验的变异系数均小于10%。用该方法对273份进口牛血清进行AKAV抗体检测,发现10份血清为阳性。总之,本研究建立的trGc_(aa407~614)-ELISA方法为血清样品中赤羽病病毒抗体的检测提供了有效手段。
|
| 关 键 词： | 赤羽病病毒；截短Gcaa407~614蛋白；原核表达；间接ELISA；抗体检测 |
Establishment of an Indirect ELISA for Antibody Detection of Akabane Virus Based on Recombinant Truncated Gcaa407-614 Protein |
| |
| Wang Jianhu,Zhao Dan,Chen Benlong,Zhang Junzhe,Wang Yuling,Xiao Yan. Establishment of an Indirect ELISA for Antibody Detection of Akabane Virus Based on Recombinant Truncated Gcaa407-614 Protein[J]. China Animal Health Inspection, 2019, 36(5): 85-92 |
| |
| Authors: | Wang Jianhu Zhao Dan Chen Benlong Zhang Junzhe Wang Yuling Xiao Yan |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国动物检疫》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《中国动物检疫》下载全文 |
|
