| 茶树肉桂酸4-羟基化酶基因的克隆及表达分析 |
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| 引用本文： | 姚胜波,王文钊,李明卓,许玉娇,王云生,刘亚军,高丽萍,夏涛. 茶树肉桂酸4-羟基化酶基因的克隆及表达分析[J]. 茶叶科学, 2015, 35(1): 35-44. DOI: 10.3969/j.issn.1000-369X.2015.01.008 |
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| 作者姓名： | 姚胜波 王文钊 李明卓 许玉娇 王云生 刘亚军 高丽萍 夏涛 |
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| 作者单位： | 1. 安徽农业大学 教育部茶叶生物化学与生物技术重点实验室,安徽 合肥 230036; 2. 安徽农业大学生命科学学院,安徽 合肥 230036 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，安徽省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 肉桂酸4-羟基化酶（Cinnamate 4-hydroxylase, C4H）是茶树苯丙烷代谢途径中的关键酶,能够影响木质素和类黄酮等次级代谢物的生物合成。本文采用5′-RACE技术,克隆了茶树肉桂酸4-羟基化酶基因（CsC4H）的全长序列,其中开放阅读框长1β518βbp,编码505个氨基酸,推测蛋白分子量为58.15βkD,理论等电点为9.29。利用基因组步移技术克隆得到该基因上游1β840βbp的启动子序列。该启动子区域除了分布有TAAT-box和CAAT-box等基本转录元件外,还存在多个诱导型和组织特异型的顺式作用元件。实时荧光定量PCR结果表明该基因在芽、叶、茎、根中都有表达。将该基因重组至表达载体pYES-DEST52上,并在酿酒酵母WAT11中进行真核表达。利用LC-MS方法检测酶反应产物,结果表明目的蛋白能够催化肉桂酸生成p-香豆酸。
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| 关 键 词： | 茶树 肉桂酸4-羟基化酶 启动子 表达分析 真核表达 |
| 收稿时间： | 2014-07-14 |
The Gene Cloning and Expression Analysis ofC4Hin Tea Plant (Camellia sinensis) |
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| YAO Shengbo,WANGWenzhao , LIMingzhuo,XUYujiao , WANG Yunsheng,LIU Yajun,GAO Liping,XIATao. The Gene Cloning and Expression Analysis ofC4Hin Tea Plant (Camellia sinensis)[J]. Journal of Tea Science, 2015, 35(1): 35-44. DOI: 10.3969/j.issn.1000-369X.2015.01.008 |
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| Authors: | YAO Shengbo WANGWenzhao LIMingzhuo XUYujiao WANG Yunsheng LIU Yajun GAO Liping XIATao |
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| Affiliation: | 1. Key Lab of Tea Biochemistry and Biotechnology, Ministry of Education, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China; 2. School of Biology Science, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Camellia sinensis cinnamate4-hydroxylase(C4H) promoter expressionanalysis eukaryotic expression |
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