大肠埃希氏菌噬菌体swi2裂解系统的表达及协同抑菌活性测定

为了确定大肠埃希氏菌噬菌体swi2裂解系统的穿孔素(holin)与裂解酶(lysin1、lysin2)在裂解宿主菌过程中的协同作用，根据噬菌体swi2裂解系统的基因序列设计引物，搭桥PCR法分别扩增holin-lysin1、holin-lysin2、lysin1-lysin2基因，以pColdTF为载体，构建重组质粒pCold-holin-lysin1、pCold-holin-lysin2、pCold-lysin1-lysin2,在大肠埃希氏菌BL21中诱导表达，并测定各串联蛋白对大肠埃希氏菌BL21的菌内外裂解活性。结果表明，成功构建了噬菌体swi2裂解系统相关基因两两串联的重组质粒，并在原核系统中实现了holin-lysin1、holin-lysin2、lysin1-lysin2蛋白的可溶性表达。lysin1、lysin2具有天然的菌内和菌外裂解活性，而单独的holin未表现出任何抑菌活性；lysin1与lysin2、holin与lysin1之间无协同作用，而holin与lysin2之间存在协同作用，可以显著增强lysin2的菌内外裂解活性(P<0.05)。研究结果证明了ly...