鸭源大肠埃希氏菌K99菌毛基因克隆表达及生物信息学分析

为研究不同动物源性K99菌毛基因的差异,以含K99菌毛基因的鸭源大肠埃希氏菌为研究对象,通过PCR方法扩增出不含信号肽K99菌毛基因片段,分别克隆至pMD19-T和pET-32a载体,进行基因序列测定及免疫印迹分析。结果表明,所获得2个不同的K99基因序列,长度均为498 bp,除去酶切位点编码氨基酸159个,理论等电点为8.96,均带正电荷,脂肪系数均为58.43。编码蛋白均为稳定的亲水性蛋白,具有相同B细胞抗原位点。2个K99菌毛基因序列之间的同源性为99.6%,与GenBank的序列比对,鸭源K99菌毛基因与牛源、猪源的K99菌毛基因的同源性较高,说明不同动物源K99菌毛基因之间变异小,相对保守。所表达的重组蛋白能与兔抗K99单因子血清发生特异性反应。研究结果为检测不同动物来源的产肠毒素大肠埃希氏菌及相关生物制品开发应用奠定基础。