| 人XIAP基因多克隆抗体的快速制备方法研究 |
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| 引用本文： | 张婷婷,周光现,王 昕.人XIAP基因多克隆抗体的快速制备方法研究[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2011,39(9):7-12. |
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| 作者姓名： | 张婷婷 周光现 王 昕 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物科技学院;西北农林科技大学 动物科技学院;西北农林科技大学 动物科技学院 |
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| 基金项目： | 西北农林科技大学引进人才启动基金项目(2111020821) |
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| 摘 要： | 【目的】探索快速制备高品质X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)多克隆抗体的方法,为研究XIAP基因的功能及XIAP蛋白在肿瘤组织中的表达量检测提供参考。【方法】通过RT-PCR方法获得人XIAP基因的CDs区序列,与pET151/D-TOPO载体连接,构建XIAP基因的原核表达载体;考察细胞密度(OD600)、IPTG浓度、诱导温度和诱导时间对XIAP重组蛋白表达量的影响,以确定XIAP重组蛋白的最佳诱导条件,并用Ni-NTA亲和层析柱法纯化XIAP重组蛋白;用纯化的XIAP重组蛋白对2只成年新西兰白兔进行常规免疫后,再对其中1只进行耳静脉注射加强免疫,连续3d,每天免疫1次,用ELISA检测抗体效价,Western blot检测抗体特异性。【结果】①通过RT-PCR方法获得人XIAP基因的CDs区序列,与pET151/D-TOPO载体连接,构建XIAP基因的原核表达载体,测序后,与GenBank中序列的的相似度为97%。②XIAP重组蛋白的最佳诱导条件为:温度30℃,初始诱导细胞密度(OD600)为0.6,IPTG浓度0.5mmol/L,诱导时间4h。在此条件下,XIAP重组蛋白多以包涵体的形式存在于细胞沉淀中。③利用Ni-NTA亲和层析柱法,在pH为5.9和4.5的洗脱液中均可获得质量浓度为600μg/mL的XIAP重组蛋白。④耳静脉连续加强免疫是刺激动物机体快速产生抗体的有效方法(31d)。ELISA和Western blot检测结果表明,耳静脉连续加强免疫产生的XIAP抗体的效价和特异性均明显高于常规免疫所产生的抗体。【结论】耳静脉连续加强免疫能够显著提高XIAP抗体的效价,且能有效缩短多克隆抗体的制备时间。
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| 关 键 词： | 重组蛋白表达 多克隆抗体 XIAP基因 耳静脉连续加强免疫 |
| 收稿时间： | 2011/3/18 0:00:00 |
Study on a rapid method for preparation of human XIAP polyclonal antibody |
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| ZHANG Ting-ting,ZHOU Guang-xian,WANG Xin,ZHANG Zhi-ying.Study on a rapid method for preparation of human XIAP polyclonal antibody[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2011,39(9):7-12. |
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| Authors: | ZHANG Ting-ting ZHOU Guang-xian WANG Xin ZHANG Zhi-ying |
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| Institution: | ZHANG Ting-ting,ZHOU Guang-xian,WANG Xin,ZHANG Zhi-ying(College of Animal Science and Technology,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | prokaryotic expression polyclonal antibody XIAP gene immune boosting via era vein injection |
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