| 草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 张金凤,曾令兵,张辉,周勇,肖艺,苏岚,高正勇. 草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法的建立[J]. 中国水产科学, 2013, 20(1): 129-136 |
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| 作者姓名： | 张金凤 曾令兵 张辉 周勇 肖艺 苏岚 高正勇 |
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| 作者单位： | 华中农业大学水产学院;中国水产科学研究院长江水产研究所 |
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| 基金项目： | 国家现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目(CARS-46-11) |
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| 摘 要： | 根据草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)衣壳蛋白VP6编码基因的序列设计特异性引物,以病毒全基因组RNA为模板,通过对反应条件进行优化,建立了GCRV的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。检测结果表明,本方法可在63℃下1 h内实现靶片段的大量扩增,扩增产物经凝胶电泳呈现梯型条带,反应体系中添加SYBR Green I荧光染料后,绿色阳性结果明显区别于橙色阴性结果。该检测体系针对草鱼呼肠孤病毒的检测灵敏度高,其最低检测限为33 pg,与常规RT-PCR方法相比较,灵敏度高10倍,且与斑点叉尾鮰呼肠孤病毒(CCRV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)、大鲵虹彩病毒(GSIV)等无交叉反应。该方法灵敏度及特异性高,且不需昂贵仪器设备,为快速检测草鱼呼肠孤病毒与诊断草鱼出血病提供了简捷快速的技术手段。
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| 关 键 词： | 草鱼出血病 呼肠孤病毒 逆转录环介导等温扩增 检测 |
| 修稿时间： | 2013-02-07 |
Development of a reverse transcription-loop mediated isothermal amplification (RT-LAMP) assay for detection of grass carp reovirus |
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| ZHANG Jinfeng,ZENG Lingbing,ZHANG Hui,ZHOU Yong,XIAO Yi,SU Lan,GAO Zhengyong. Development of a reverse transcription-loop mediated isothermal amplification (RT-LAMP) assay for detection of grass carp reovirus[J]. Journal of Fishery Sciences of China, 2013, 20(1): 129-136 |
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| Authors: | ZHANG Jinfeng ZENG Lingbing ZHANG Hui ZHOU Yong XIAO Yi SU Lan GAO Zhengyong |
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| Affiliation: | 1.Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070,China; 2.Yangtze River Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Wuhan 430223,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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