| 微小隐孢子虫Ⅰ型跨膜蛋白Cgd7_4560的亚细胞定位及其对HCT-8细胞的黏附特性 |
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| 引用本文： | 邵清延,王科杰,王东强,张天宇,焦新,尹继刚.微小隐孢子虫Ⅰ型跨膜蛋白Cgd7_4560的亚细胞定位及其对HCT-8细胞的黏附特性[J].吉林农业大学学报,2019,41(3):359-364. |
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| 作者姓名： | 邵清延 王科杰 王东强 张天宇 焦新 尹继刚 |
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| 作者单位： | 吉林大学人兽共患病研究所,人兽共患病研究教育部重点实验室,长春130062;吉林大学人兽共患病研究所,人兽共患病研究教育部重点实验室,长春130062;吉林大学人兽共患病研究所,人兽共患病研究教育部重点实验室,长春130062;吉林大学人兽共患病研究所,人兽共患病研究教育部重点实验室,长春130062;吉林大学人兽共患病研究所,人兽共患病研究教育部重点实验室,长春130062;吉林大学人兽共患病研究所,人兽共患病研究教育部重点实验室,长春130062 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 型跨膜蛋白在顶复门寄生虫入侵宿主细胞过程中发挥重要作用。试验对微小隐孢子虫Ⅰ型跨膜蛋白Cgd7_4560进行生物信息学分析,选取抗原性强的序列,采用PCR方法扩增出微小隐孢子虫DNA Cgd7_4560部分基因。将该片段分别连接到p ET-28a和p GEX-4T-1载体,构建重组表达质粒p ET-28a-Cgd7_4560和p GEX-Cgd7_4560,并将其转化到大肠埃希氏杆菌BL21 (Condon plus),IPTG诱导表达获得重组蛋白。SDSPAGE和Western blot分析,His标签重组蛋白为31 ku,GST标签重组蛋白为53 ku。用His标签重组蛋白免疫家兔,间接ELISA方法检测血清抗体效价达到1∶16 000,成功制备多克隆抗体。采用Western blot方法验证该抗体能够特异性的识别虫体天然蛋白,间接免疫荧光分析该蛋白在子孢子头端,间接ELISA结果表明GSTCgd7_4560能与HCT-8细胞黏附,为其功能研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 微小隐孢子虫 Ⅰ型跨膜蛋白 原核表达 亚细胞定位 |
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