| 梅花鹿γ干扰素克隆表达及抗病毒活性测定 |
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| 作者姓名： | 刘颖 刘冬光 廖娟红 于清龙 熊家军 杨利国 陈焕春 郭爱珍 |
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| 作者单位： | 1. 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉,430070;华中农业大学动物医学院,湖北武汉,430070
2. 华中农业大学动物科技学院,湖北武汉,430070 |
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| 基金项目： | 国家973项目，湖北省自然基金重大项目，艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治科技重大专项 |
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| 摘 要： | 提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为梅花鹿γ干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%.将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠埃希菌BL21中实现了高效表达.表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的32.6%.用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性,重组梅花鹿γ干扰素抗病毒活性分别约为7.25×104 U/mL和4.61×104 U/mL.结果表明,重组梅花鹿γ干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定.
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| 关 键 词： | 梅花鹿 γ干扰素 抗病毒活性 |
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