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| 牛IFN-α、IFN-β及IFN-γ mRNA实时SYBR GreenⅠ定量RT-PCR检测方法的建立及应用 | |
| 引用本文： | 韩猛立,杨井泉,姚守秀,黄新,薄新文,钟发刚. 牛IFN-α、IFN-β及IFN-γ mRNA实时SYBR GreenⅠ定量RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 中国预防兽医学报, 2010, 32(10). DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.2010.10.05 |
| 作者姓名： | 韩猛立 杨井泉 姚守秀 黄新 薄新文 钟发刚 |
| 作者单位： | 1. 新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室,新疆,石河子,832000;石河子大学动物科技学院,新疆,石河子,832003 2. 石河子大学动物科技学院,新疆,石河子,832003 3. 新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室,新疆,石河子,832000 |
| 基金项目： | "973"计划前期研究专项，国家自然基金项目，兵团博士资金项目 |
| 摘 要： | 为建立灵敏度高、特异性强、能够快速检测牛α-、β-、γ-干扰素(BoIFN-α、BoIFN-β、BoIFN-γ)mRNA的实时荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank中登录的BoIFN-α、BoIFN-β和BoIFN-γ基因序列,分别在其保守区内设计并合成特异引物,以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)mRNA为内参,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。将BoIFN-α、BoIFN-β和BoIFN-γcDNA分别克隆到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α内,经PCR及测序鉴定,将得到的阳性重组质粒制备成标准品,建立SYBR Green荧光定量PCR标准曲线并分析溶解曲线,进行灵敏性、特异性和重复性试验。结果表明:BoIFN-α、BoIFN-β、BoIFN-γ和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×101copies/μL～1×107copies/μL内均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,特异性和重复性较好。本研究建立的检测牛IFN-α、IFN-β和IFN-γmRNA的实时荧光定量PCR方法,为牛IFN mRNA水平上的定量分析奠定了基础。 |
| 关 键 词： | SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量PCR 牛 α-干扰素 β-干扰素 γ-干扰素 |
Establishment of a SYBR Green I real-time quantitative RT-PCR assay for detection of bovine alpha-interferon, bata-interferon and gamma-interferon mRNA |
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| HAN Meng-li,YANG Jing-quan,YAO Shou-xiu,HUANG Xin,BO Xin-wen,ZHONG Fa-gang. Establishment of a SYBR Green I real-time quantitative RT-PCR assay for detection of bovine alpha-interferon, bata-interferon and gamma-interferon mRNA[J]. Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine, 2010, 32(10). DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.2010.10.05 | |
| Authors: | HAN Meng-li YANG Jing-quan YAO Shou-xiu HUANG Xin BO Xin-wen ZHONG Fa-gang |
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