| 1.1倍全长HBV基因组克隆转染细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 罗强,苏怀彬,梁盼盼,袁作为,张文露,黄爱龙,胡接力. 1.1倍全长HBV基因组克隆转染细胞系的建立[J]. 兽医导刊, 2012, 33(8) |
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| 作者姓名： | 罗强 苏怀彬 梁盼盼 袁作为 张文露 黄爱龙 胡接力 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆,400016 |
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| 摘 要： | 目的 构建pneo-CH9/3091真核表达质粒,并建立其稳定表达的HepG2细胞系.方法 质粒pCH9/3091包含HBVl.1倍体和CMV启动子,将PCR扩增出的带有新霉素(neo)抗性的基因片段插入pCH9/3091构建成重组质粒pneo-CH9/3091.重组质粒经酶切,测序验证正确后,通过脂质体介导转入人肝癌细胞HepG2.G418筛选后,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测所得单克隆细胞培养上清液的HBV表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg),PCR检测细胞上清液的病毒颗粒,Western blot检测细胞内HBV核心蛋白(HBcAg)的表达,以及Southern blot检测细胞内核心颗粒HBV DNA的复制情况.结果 有3株细胞系培养上清HBsAg和HBeAg检测呈现阳性,且HBV C区片段可通过PCR扩增出来,Western bot结果 提示只有细胞株HepG2 -H7可以表达HBV核心蛋白.Southern blot结果 说明此细胞株基因组中有HBV基因组的稳定整合,并且能在细胞内检测出HBV DNA复制中间体.结论 成功构建1株HBV稳定整合细胞株HepG2-H7,能持续产生HBV病毒颗粒.
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| 关 键 词： | 乙肝病毒 HepG2细胞 稳定细胞株 |
Establishment of cloned cell line transfected with 1.1-unit-length HBV genome |
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| Luo Qiang , Su Huaibin , Liang Panpan , Yuan Zuowei , Zhang Wenlu , Huang Ailong , Hu Jieli. Establishment of cloned cell line transfected with 1.1-unit-length HBV genome[J]. Veterinary Orientation, 2012, 33(8) |
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| Authors: | Luo Qiang Su Huaibin Liang Panpan Yuan Zuowei Zhang Wenlu Huang Ailong Hu Jieli |
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