| 猪瘟病毒囊膜蛋白E2基因真核分泌型表达载体的构建及其表达 |
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| 引用本文： | 徐彦召,张彦明,何 雷.猪瘟病毒囊膜蛋白E2基因真核分泌型表达载体的构建及其表达[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2009,37(5):7-11. |
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| 作者姓名： | 徐彦召 张彦明 何 雷 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划) |
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| 摘 要： | 【目的】构建猪瘟病毒囊膜蛋白(E2 protein)基因的真核表达载体,并将其在猪脐静脉血管内皮细胞中进行表达。【方法】采用PCR技术扩增出E2蛋白全长基因(E2qc)序列和去除跨膜基因(E2sh)序列,并将其克隆入真核表达载体pSecTag2(A)中,构建pSecTag-E2qc和pSecTag-E2sh表达载体,分别进行PCR、双酶切及测序鉴定。用脂质体法将阳性克隆瞬时转染猪脐静脉血管内皮细胞,对转染细胞进行RT-PCR检测目的基因的转录情况,同时对转染细胞及细胞上清液进行SDS-PAGE和Western-blot分析,以检测目的蛋白的表达情况。【结果】成功克隆了E2蛋白基因全长序列1119bp和去除E2蛋白跨膜基因序列999bp的目的基因。构建的表达载体经PCR、双酶切法及测序鉴定均无误。转染后细胞的RT-PCR结果显示,目的基因被成功转录。转染后细胞及细胞上清液的SDS-PAGE和Western-blot结果显示,目的基因被成功表达。【结论】成功构建了猪瘟病毒E2蛋白的真核表达载体,转染猪脐静脉血管内皮细胞后,分泌表达了猪瘟病毒E2重组蛋白。
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| 关 键 词： | 猪瘟病毒囊膜蛋白 猪脐静脉血管内皮细胞 分泌型真核表达载体 真核表达 |
| 收稿时间： | 2008/7/10 0:00:00 |
Construction of eukaryotic expression vector of CSFV E2 genes and its secretory expression |
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| XU Yan-zhao,ZHANG Yan-ming,HE Lei,TANG Qing-hai,DAI Chen,WANG Jing,YANG Xiao-yun.Construction of eukaryotic expression vector of CSFV E2 genes and its secretory expression[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2009,37(5):7-11. |
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| Authors: | XU Yan-zhao ZHANG Yan-ming HE Lei TANG Qing-hai DAI Chen WANG Jing YANG Xiao-yun |
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| Institution: | (College of Veterinary Medicine ,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | classical swine fever virus envelope protein SUVECs recombinant plasmid secretory expression |
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