| 棉花GhPDP基因原核表达条件的优化 |
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| 引用本文： | 刘东,兰艳平,张丽,赵岩,渠云芳,黄晋玲. 棉花GhPDP基因原核表达条件的优化[J]. 华北农学报, 2020, 35(5): 55-61. DOI: 10.7668/hbnxb.20191119 |
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| 作者姓名： | 刘东 兰艳平 张丽 赵岩 渠云芳 黄晋玲 |
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| 作者单位： | 山西农业大学 农学院,山西 太谷 030801,山西农业大学 农学院,山西 太谷 030801,山西农业大学 农学院,山西 太谷 030801,山西农业大学 农学院,山西 太谷 030801,山西农业大学 农学院,山西 太谷 030801,山西农业大学 农学院,山西 太谷 030801 |
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| 摘 要： | 丙酮酸脱氢酶磷酸酶GhPDP与棉花雄性不育能量调控方面密切相关。为了得到大量有活性的GhPDP蛋白,试验将对目的蛋白原核表达条件进行优化。将编码GhPDP基因的cDNA序列插入pET-22b中构建重组表达载体pET-22b-GhPDP,转化到大肠杆菌Transetta(DE3)进行IPTG诱导表达,通过单因素试验和正交试验对诱导温度、诱导时间、IPTG终浓度和OD600进行优化,利用SDS-PAGE和GeneTools凝胶分析软件分析目的蛋白的表达量,以摸索目的蛋白可溶性表达的最佳条件。结果显示,成功构建重组表达载体pET-22b-GhPDP;目的蛋白在Transetta(DE3)菌株中表达,表达形式多为包涵体;单因素试验结果表明,在诱导温度20℃、诱导时间为5 h、IPTG终浓度0.10 mmol/L和菌体密度OD600 为0.8条件下,目的蛋白可溶性表达量最高;通过正交分析得出,影响目的蛋白可溶性表达的因素强度由高到低依次为诱导温度、IPTG终浓度、诱导时间及菌体密度OD600。综合单因素试验和正交试验结果,确定诱导...
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| 关 键 词： | 棉花 GhPDP基因 原核表达 条件优化 |
Optimization of Prokaryotic Expression Conditions of Cotton GhPDP Gene |
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| LIU Dong,LAN Yanping,ZHANG Li,ZHAO Yan,QU Yunfang,HUANG Jinling. Optimization of Prokaryotic Expression Conditions of Cotton GhPDP Gene[J]. Acta Agriculturae Boreali-Sinica, 2020, 35(5): 55-61. DOI: 10.7668/hbnxb.20191119 |
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| Authors: | LIU Dong LAN Yanping ZHANG Li ZHAO Yan QU Yunfang HUANG Jinling |
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