牛α0干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定 |
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引用本文: | 彭统全,邵建伟,张润祥,曹翀,马波,高明春,王君伟.牛α0干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定[J].畜牧兽医学报,2015(1):124-129. |
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作者姓名: | 彭统全 邵建伟 张润祥 曹翀 马波 高明春 王君伟 |
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作者单位: | 东北农业大学动物医学学院 |
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基金项目: | 现代农业(奶牛)产业技术体系(CARS-37);国家科技支撑计划项目(2012BAD12B05);国家科技支撑计划子课题(2012BAD12B03-3);黑龙江省科技攻关项目(GA09B302) |
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摘 要: | 克隆牛α0干扰素(BoIFN-α0)成熟肽基因,使其在真核细胞中表达,并研究其表达蛋白质的活性。通过PCR方法扩增得到BoIFN-α0成熟肽基因,然后将其连接到含分泌信号肽序列的Pichia pastoris表达载体pPICZαA上,构建重组质粒pPICZαA-BoIFN-α0,重组质粒经PmeⅠ酶切线性化后电转化宿主菌GS115。转化子经100μg·mL-1 zeocinTM筛选和PCR鉴定,阳性重组菌经甲醇诱导后实现了BoIFN-α0在毕赤酵母系统中的分泌表达。结果表明:SDS-PAGE和Western blot结果显示表达产物相对分子质量约为18和21ku,推测表达产物发生了一定程度的糖基化。细胞病变抑制试验结果表明,重组BoIFN-α0具有较高的抗病毒活性,达到5.72×106 U·mg-1。这些研究结果为牛IFN-α的更深层次应用奠定了基础。
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关 键 词: | 牛BoIFN-α0亚型 巴斯德毕赤酵母 分泌表达 抗病毒活性 |
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