一株大黄鱼虹彩病毒的分离鉴定及多克隆抗体的制备

2021年7月，浙江省象山某养殖场养殖的大黄鱼（Larimichthys crocea）出现类似大黄鱼虹彩病毒引起的疾病。采用鲤上皮瘤细胞培养和病毒主要衣壳蛋白测序分析的方法，从患病的大黄鱼中分离到一株病毒。该病毒接种到鲤上皮瘤细胞（EPC）后出现空斑、脱落的细胞病变症状。根据虹彩病毒MCP和ATPase基因保守序列设计特异性引物对病毒组织样本进行PCR扩增，得到分别为1 367 bp和740 bp的目的基因片段。将MCP基因扩增片段测序，经BLAST对比及系统发育树聚类分析，确定该分离的病毒属虹彩病毒科细胞肿大病毒属。通过蔗糖密度梯度离心纯化，用透射电镜观察该病毒粒子呈正六边形，直径为120～150 nm。用纯化病毒作为抗原免疫小鼠获得抗大黄鱼虹彩病毒的多克隆抗体，效价为1∶7 000；通过SDS-PAGE和Western blotting初步确定3个免疫蛋白。本研究为大黄鱼虹彩病毒纯化提供一种新方法，并初步分离出免疫蛋白，为该病毒相关分子生物学研究、蛋白研究以及疫苗制备等提供理论依据。