尼罗罗非鱼无乳链球菌微滴式数字PCR检测方法的建立及临床应用

通过设计筛选引物和探针、优化反应浓度和退火温度，构建一种尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的微滴式数字PCR(dd PCR)检测方法，分析该方法的敏感性、特异性及重复性，并应用于临床样品检测。结果显示：当引物、探针浓度分别为0.9μmol·L^-1、0.3μmol·L^-1且退火温度为56.9℃时，建立的罗非鱼无乳链球菌dd PCR方法阴、阳性微滴分布界限明显，平均拷贝数高，有较高扩增反应效率；线性关系线良好(R²=0.997 3)，最低检测限为2.56 copies·μL^-1；与猪链球菌2型、鱼类海豚链球菌和其他5种常见的水生动物疫病病原体无交叉反应；重复变异系数为3.15%；临床样品检测结果与实时荧光PCR方法结果的符合率100%，与细菌分离鉴定方法结果符合率为94.12%。结果表明，建立的罗非鱼无乳链球菌dd PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好，可对罗非鱼无乳链球菌感染的临床样品进行定量检测，为尼罗罗非鱼无...