检测非洲猪瘟病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法的建立 |
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引用本文: | 林彦星,翁巧玉,吴江,黄超华,史卫军,金业,陈鹏,张彩虹,杨俊兴,阮周曦,曹琛福,陈兵,曾少灵,花群义.检测非洲猪瘟病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法的建立[J].中国兽医学报,2024(1):7-11. |
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作者姓名: | 林彦星 翁巧玉 吴江 黄超华 史卫军 金业 陈鹏 张彩虹 杨俊兴 阮周曦 曹琛福 陈兵 曾少灵 花群义 |
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作者单位: | 1. 深圳海关动植物检验检疫技术中心;3. 深圳市心月生物科技有限公司 |
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基金项目: | 国家重点研发计划资助项目(2021YFD1801203); |
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摘 要: | 利用非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白不同抗原表位的2株单克隆抗体,1株作为捕获抗体,另1株用辣根过氧化物酶(HRP)标记后作为检测抗体,采用方阵法对ELISA反应条件进行优化,建立了检测ASFV抗原的双抗体夹心ELISA方法。结果显示,该方法中捕获抗体包被质量浓度为1.25 mg/L,酶标单克隆抗体的最适稀释度为1∶4 000。通过试验确定该方法的临界值为0.299,当样品D450值≥0.3,且P/N大于2时,判定为阳性。该双单抗夹心ELISA方法可特异性检测ASFV抗原,其他抗原检测结果均为阴性,特异性强;重复性好,批内和批间变异系数(CV)均小于8%。应用本研究建立的方法与荧光PCR方法同时对225份临床样品进行检测,总符合率为96.89%。结果表明,本研究建立的双抗体夹心ELISA方法可用于ASFV抗原的大量样品检测,为ASF防控提供了技术支持。
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关 键 词: | ASFV 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA |
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