| 非洲猪瘟病毒p30蛋白在本氏烟草中的表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立 |
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| 作者姓名： | 刘悦 魏天 张春雨 张建峰 王成宇 张芳毓 朱日宁 鞠安琪 王思月 曲磊 张守峰 扈荣良 梁静 王永志 |
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| 作者单位： | 1. 吉林农业大学生命科学学院;2. 吉林省农业科学院畜牧兽医研究所;3. 中国农业科学院长春兽医研究所 |
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| 摘 要： | 为建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)抗体间接ELISA检测方法，利用马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)介导的植物生物反应器在本氏烟草中表达ASFV p30蛋白，并以表达的蛋白作为包被抗原，对间接ELISA各反应条件进行优化。依据ASFV SY-18株的CP204L(p30)基因序列，按照本氏烟草密码子的偏好性，对p30基因(231～536 bp)的核苷酸序列进行优化、人工合成及克隆，通过In-Fusion连接技术将扩增的p30基因插入到PVY基因组的P1和HC-Pro基因之间，构建PVY-p30重组病毒质粒，以摩擦的方式将质粒接种本氏烟草叶片，14 d后，通过RT-PCR和Western blot分析目的基因的转录和重组蛋白的表达情况，并利用Ni-NTA-琼脂糖亲和层析柱纯化本氏烟草中表达的p30重组蛋白，Western blot分析p30重组蛋白的纯化效果和反应原性，将纯化后的p30重组蛋白作为包被抗原，建立ASFV抗体间接ELISA检测方法。结果显示，构建的PVY-p30重组病毒能够系统性侵染本氏烟草；p30重组...
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| 关 键 词： | 间接ELISA 非洲猪瘟病毒 马铃薯Y病毒 植物生物反应器 p30蛋白 |
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