马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏茵中表达及其多克隆抗体制备 |
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作者姓名: | 白宇 童铁钢 刘光亮 肖一红 王群 徐树兰 张维军 吴东来 |
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作者单位: | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001 |
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基金项目: | 黑龙江省自然科学基金项目(ZJN.0602-01) |
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摘 要: | 采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞(PBMC)中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素(Equine interferon-γ,EIFN-γ)基因,将其克隆至载体pCR2.1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒(pCR-EIFN-γ)中扩增马干扰素成熟蛋白(MatureEIFN-γ,mEIFN-γ)基因,并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)。重组子经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,将纯化后的表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。结果表明,mEIFN-γ基因全长为441b口,含一个开放阅读框,编码146个氨基酸的成熟蛋白;对其表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在,重组蛋白相对分子量约为18Ku,且具有免疫反应活性。mEIFN-γ基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下,采用Ni^+亲和层析纯化方法均可获得高纯度的重组马γ-干扰素制备的多克隆抗体,为建立马γ-干扰素检测方法、监测机体免疫状态和研究机体免疫机制奠定了基础。
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关 键 词: | 马γ-干扰素 表达 纯化 多克隆抗体 |
文章编号: | 1008-0589(2007)11-0878-05 |
修稿时间: | 2007-03-01 |
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