| 猪圆环病毒2型Cap 蛋白部分基因序列与大肠杆菌LTB成熟肽基因的融合表达及免疫原性研究 |
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| 引用本文： | 侯强红,余兴龙,李微,李润成,罗维,刘浩,尹恒,刘忠华. 猪圆环病毒2型Cap 蛋白部分基因序列与大肠杆菌LTB成熟肽基因的融合表达及免疫原性研究[J]. 中国预防兽医学报, 2007, 29(11): 847-851 |
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| 作者姓名： | 侯强红 余兴龙 李微 李润成 罗维 刘浩 尹恒 刘忠华 |
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| 作者单位： | 湖南农业大学,动物医学学院,湖南,长沙,410128 |
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| 摘 要： | 为了获得猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)衣壳蛋白(Cap)基因3’端396 bp的片段与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)成熟肽编码区融合基因的高效表达,并检验重组蛋白的免疫保护效果。以含PCV-2全基因组的pMDT PCV-2质粒为模板,用PCR的方法扩增PCV-2 Cap基因,并将其克隆到pET28a( )中,构建得到pET-Cap质粒,利用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切切下Cap基因3’末端396 bp的片段,插入到pET-LTB原核表达质粒LTB基因的3’末端,从而构建pET-LTB△Cap原核表达质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS后,用IPTG诱导重组菌,用SDS-PAGE电泳和Western blot检测诱导物。表达产物经初步纯化后用昆明系小白鼠做免疫保护实验。结果表明:pET-LTB△Cap重组融合表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白分子量约为29Ku,表达量约占菌体蛋白的36.67%,融合蛋白能被PCV-2阳性血清识别。攻毒后,所有小鼠临床表现正常。用PCR检测有1/8的免疫小鼠感染了PCV-2,而对照组8只小鼠都感染了PCV-21。PCV-2 Cap基因3’端396 bp的片段与LTB基因融合能实现高效表达,表达产物免疫的小白鼠可抵抗PCV-2的攻击此研究为PCV-2基因工程疫苗的研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 猪圆环病毒2型 大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB) 融合表达 免疫原性 |
| 文章编号： | 1008-0589（2007）11-0847-05 |
| 修稿时间： | 2007-05-17 |
Fusion expression of PCV-2 Cap partial gene and E.coli heat-labile toxin B subunit gene and immunonicity of recombinant protein |
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| HOU Qiang-hong,YU Xing-long,LI Wei,LI Run-cheng,LUO Wei,LIU Hao,YIN Heng,LIU Zhong-hua. Fusion expression of PCV-2 Cap partial gene and E.coli heat-labile toxin B subunit gene and immunonicity of recombinant protein[J]. Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine, 2007, 29(11): 847-851 |
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| Authors: | HOU Qiang-hong YU Xing-long LI Wei LI Run-cheng LUO Wei LIU Hao YIN Heng LIU Zhong-hua |
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| Affiliation: | College of Veterinary, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcine circovirus type 2 E.coli heat-labile toxin B subunit(LTB) fusion expression immunonicity |
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