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| 养殖大黄鱼病原弧菌多重PCR检测技术的建立和应用 | |
| 引用本文： | 祝璟琳, ,王国良,金珊. 养殖大黄鱼病原弧菌多重PCR检测技术的建立和应用[J]. 中国水产科学, 2009, 2(2) |
| 作者姓名： | 祝璟琳 王国良 金珊 |
| 作者单位： | 1. "应用海洋生物技术"教育部重点实验室,宁波大学生命科学与生物工程学院,浙江宁波315211;中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,江苏,无锡,214081 2. "应用海洋生物技术"教育部重点实验室,宁波大学生命科学与生物工程学院,浙江宁波315211;宁波大学医学院,浙江宁波,315211 3. "应用海洋生物技术"教育部重点实验室,宁波大学生命科学与生物工程学院,浙江宁波315211 |
| 基金项目： | 教育部长江学者和创新团队发展计划，浙江省科技厅重点攻关项目，浙江省新苗人才计划 |
| 摘 要： | 溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、副溶血弧菌(vibrio parahaemolyticus)和哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是浙江省养殖大黄鱼(Pseudnosciaena crocea)弧菌病的主要致病菌.本研究选择针对溶藻弧菌和副溶血弧菌的胶原酶基因,哈维氏弧菌的部分ToxR基因的特异性,优化设计了3对特异性引物,通过进行多重PCR反应体系优化,多重PCR产物的测序鉴定与特异性和敏感性实验,建立了一种检测致病性弧菌的多重PCR检测方法.经过琼脂糖凝胶电泳后的条带分析判断,可以在一个PCR管中同时成功地检测这3种病原细菌,含溶藻弧菌、哈维氏弧菌和副溶血弧菌3种致病弧菌核酸的阳性对照样品分别扩增出大小为737 hp、382 bp和271 bp的预期产物,其灵敏度是102～102 CFU/mL.将该方法应用于检测人工感染后的养殖大黄鱼病鱼肝脏和肾脏,结果在6份组织样本中,5份检出原始感染菌株,与API 20E鉴定结果相符;对弧菌病流行季节采集的未发病的16份养殖大黄鱼组织样本和16份水体样本进行抽检,结果在1份大黄鱼组织样本中检出哈维氏弧菌,7份水体样本中检出这3种弧菌中的1种或2种,鉴定结果与API 20E鉴定结果符合率为93.75%.说明该方法不仅可以检测发病鱼,还可以检测无病症带菌大黄鱼以及带菌水样,且说明海洋水体中存在着大黄鱼弧菌病的致病菌.结果说明,多重PCR检测方法具有较高的敏感性与特异性,可以缩短检测时间,降低检测成本,该方法的建立对养殖大黄鱼弧菌病的快速诊断和分子流行病学的调查具有重要意义. |
| 关 键 词： | 大黄鱼 胶原酶基因 ToxR基因 多重PCR |
Development and application of multiplex PCR of vibrios pathogenic to cultured large yellow croaker, Pseudnosciaena crocea (Richardson) |
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| ZHU Jing-lin,WANG Guo-liang,JIN Shan. Development and application of multiplex PCR of vibrios pathogenic to cultured large yellow croaker, Pseudnosciaena crocea (Richardson)[J]. Journal of Fishery Sciences of China, 2009, 2(2) | |
| Authors: | ZHU Jing-lin WANG Guo-liang JIN Shan |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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