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含PHYA基因的EDSV转移载体构建及表达研究
引用本文:杜华茂,黄伟,谢和芳,王洪波,范守成.含PHYA基因的EDSV转移载体构建及表达研究[J].西南大学学报,2005,27(1).
作者姓名:杜华茂  黄伟  谢和芳  王洪波  范守成
作者单位:杜华茂,黄伟,谢和芳,DU Hua-mao,HUANG-Wei,XIE He-fang(西南农业大学,蚕学与生物技术学院,重庆,400716);王洪波,WANG Hong-bo(重庆永健生物技术有限责任公司,重庆,荣昌,402464);范守成,FANG Shou-cheng(重庆养猪研究科学院,重庆,荣昌,402460) 
摘    要:将原核表达载体pET 30中的黑曲霉源植酸酶基因(phyA)亚克隆到真核表达载体pCDNA 3的kpnI-EcoRI位点.根据pCDNA 3的序列在增强子的上游(209位)和BGH polyA下游(2049位)设计1对引物HM 1,HM 2扩增出含phyA基因的表达盒.将此表达盒以平末端连接的方式克隆到减蛋综合征病毒(EDSV)基因组右末端的转移载体pUHBC的SalI位点,酶切分析鉴定表达盒的方向,得到反向插入重组质粒pEDS-phyA.用Lipofectamine 2000将8μg pEDS-phyA转染90%满度的鸭胚成纤维细胞,6 h后换生长液,24 h后收获细胞,以pUHBC转染作对照.钼酸胺法测定试验样品植酸酶酶活为977 U/mL.实验结果表达我们已成功地构建了含植酸酶基因的转移载体,为进一步构建重组减蛋综合征病毒载体表达植酸酶打下基础.

关 键 词:植酸酶  减蛋综合征病毒  转移载体  瞬时表达

CONSTRUCTION OF A PhyA GENE -CONTAINING TRANSFER VECTOR FOR EDSV AA -2 STRAIN AND ITS INSTANT EXPRESSION IN DUCK EMBRYO FIROBLAST
DU Hua-mao,HUANG-Wei,XIE He-fang,WANG Hong-bo,FANG Shou-cheng.CONSTRUCTION OF A PhyA GENE -CONTAINING TRANSFER VECTOR FOR EDSV AA -2 STRAIN AND ITS INSTANT EXPRESSION IN DUCK EMBRYO FIROBLAST[J].Journal of Southwest Agricultural University,2005,27(1).
Authors:DU Hua-mao  HUANG-Wei  XIE He-fang  WANG Hong-bo  FANG Shou-cheng
Abstract:
Keywords:
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